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SDS-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒图片
产品货号:
RFT076
中文名称:
SDS-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒
英文名称:
SDS-PAGE gel preparation and electrophoresis Kit
产品规格:
50次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒包含凝胶制备以及蛋白电泳所需的全部试剂,可配制至少50块常规大小的PAGE胶。


组分规格保存条件
40%PAA(29:1)100mL4℃
4×Tris/SDS分离胶缓冲液pH8.8100mL4℃
4×Tris/SDS浓缩胶缓冲液pH6.850mL4℃
APS(干粉)0.5gRT
TEMED0.5mL4℃,避光
5×MonoColor蛋白上样缓冲液(含还原剂)1mL-20℃
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(干粉)1LRT



  • 准备工作:
    • 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度。
      表一:不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围
      SDS-PAGE分离胶浓度最佳分离范围
      6%50~150kD
      8%30~90kD
      10%20~80kD
      12%12~60kD
      15%10~40kD

    • 10% APS的配制-5mL:
      将0.5 gAPS干粉溶于5mL灭菌水中,彻底溶解后分装,1mL/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间,以防失效。10% APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20℃保存的10%APS。

  • 配制分离胶
    • 参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
    • 按照表二将不同体积的成分在小烧杯中混合;加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
      表二:SDS-PAGE凝胶配方表
      成分浓缩胶分离胶
      4%8%10%12%15%
      40% PAA(29:1)0.2mL1mL1.25mL1.5mL1.9mL
      4×浓缩胶缓冲液0.5mL----
      4×分离胶缓冲液-1.25mL1.25mL1.25mL1.25mL
      超纯水1.3mL2.7mL2.5mL2.2mL1.9mL
      TEMED2μL5μL5μL5μL5μL
      10% APS20μL50μL50μL50μL50μL
      总体积2mL5mL5mL5mL5mL

    • 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于8×10cm凝胶,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1~5cm的水层,使凝胶表面保持平整。
    • 静置10~20分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,说明凝胶已聚合。

  • 浓缩胶制备
    • 去除覆盖在分离胶上的水层。
    • 按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合;加入10%过硫酸铵和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
    • 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
    • 将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
    • 静置20~30分钟,等待浓缩胶聚合。

  • 电泳
    • 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液的配制(5×TGS):
      将一包5×TGS干粉全部倒入1L烧杯中,加入约900mL水彻底溶解,用水定容至1L,即配成5×TGS缓冲液(此溶液不用调节pH值)。用前再稀释5倍即配成1×TGS电泳缓冲液。
    • 样品处理:融化-混合-变性-上样
      • 将5×MonoColor蛋白上样缓冲液常温融化后混匀。
      • 将上样缓冲液与蛋白样品按照1:4的比例混匀。
      • 将蛋白样品置于95℃加热5分钟使蛋白样品充分变性。
      • 样品凉至室温后,快甩离心收集到管底,上样电泳。
    • 电泳参数设置
      恒电压150V
      起始电流35-40mA
      终止电流10-15mA
      电泳时间40~50min

    • 染色或进行下游实验。



表三:SDS-PAGE分离胶配方表
浓度成分不同凝胶体积对应各组份的取样量(ml)
5mL10mL15mL20mL
8%胶H2O2.75.48.110.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.81.252.53.755
40% PAA(29:1)1234
TEMED0.0050.010.0150.02
10% APS0.050.10.150.2
10%胶H2O2.454.97.359.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.81.252.53.755
40% PAA(29:1)1.252.53.755
TEMED0.0050.010.0150.02
10% APS0.050.10.150.2
12%胶H2O2.24.46.68.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.81.252.53.755
40% PAA(29:1)1.534.56
TEMED0.0050.010.0150.02
10% APS0.050.10.150.2
15%胶H2O1.8253.655.4757.3
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.81.252.53.755
40% PAA(29:1)1.8753.755.6257.5
TEMED0.0050.010.0150.02
10% APS0.050.10.150.2


表四:SDS-PAGE浓缩胶(4%)配方表
成分不同凝胶体积对应各组份的取样量(ml)
2mL4mL5mL10mL
H2O1.172.342.9255.85
4×Tris/SDS浓缩胶buffer pH6.80.631.261.5753.15
40% PAA(29:1)0.20.40.51
TEMED0.0020.0040.0050.01
10% APS0.020.040.050.1

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